組織研磨機對提取動物關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA

實驗目的
       研磨破碎軟骨組織（大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨），提取其總RNA。
 
實驗原理
       充分磨碎軟骨樣品（大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨），再用相關(guān)試劑提取其總RNA。
 
實驗材料和器具
樣品：大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨
儀器：多樣品組織研磨儀（上海凈信，Tissuelyser-24）
耗材：研磨罐（上海凈信，1研磨單位），研磨珠（上海凈信，8號研磨珠，1顆）
試劑：液氮若干
 
實驗步驟
1.研磨軟骨組織
1.1 取適量大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨組織，剪切成約1立方厘米小塊；
1.2 將小塊軟骨組織置于液氮中2分鐘或放入-80度冰箱冷凍30分鐘；
1.3 將樣品和研磨珠放入研磨罐中，蓋好蓋子；
1.4 將裝好樣品及鋼珠的研磨管，放入已經(jīng)在-20度冰箱預冷好的適配器中，加入變性液，β-巰基乙醇；
1.5 將適配器放入凈信研磨儀中，在14單位頻振條件下，研磨1min，可得到勻漿狀的軟骨組織；
2.總RNA提取
2.1 冰水浴下，加酸性水飽和酚，搖勻，加醋酸鈉，氯fang、異戊醇混合液，冰水浴上15min；
2.2 4℃下，離心，取上清液，加氯fang、異戊醇混合液，離心取上清，加異丙醇，-20℃下沉淀，離心，得到凝膠狀RNA和蛋白多糖混合沉淀，加無RNA酶水，溶解得膠狀溶液；
2.3 取膠狀溶液用plant RNAout試劑盒的RNA提取步驟得到總RNA沉淀，取沉淀，乙醇洗滌后用無RNA酶水溶解沉淀，即得關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA溶液。
 
實驗結(jié)果
       采用本實驗方法提取的動物關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA的收率高，并且純度高、質(zhì)量、完整性好，可以滿足分子生物學研究應用。

         總RNA甲醛變性膠電泳結(jié)果

        Ⅱ型膠原PCR擴增產(chǎn)物電泳結(jié)果

參考文獻：

［1］劉玉剛等，一種富含多糖的關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA提取方法初探，第三軍醫(yī)大學學報：2009年24期。